Beyin omurilik sıvısı (BOS) analizi, merkezi sinir sistemi içinde meydana gelen kanama, iltihaplanma, enfeksiyon, tümörler ve diğer klinik durumlar gibi çeşitli süreçlerin tespitini geliştirmek için güçlü bir araçtır. Ek olarak, BOS'taki bileşiklerin (hormonlar, ilaçlar, nörotransmiterler, biyobelirteçler, metabolitler ve virüsler gibi) seri değerlendirmeleri hem temel hem de translasyonel araştırmalarda eşit derecede önemlidir. Merkezi sinir sistemindeki BOS hacmi, salgılama ve emilim yoluyla sabit kalır.
I.Operasyonel Hususlar
BOS tipik olarak serebral ventrikül veya lomber ponksiyon yoluyla toplanır. Lomber ponksiyon, insan dışı primatlarda nispeten daha düşük bir komplikasyon riski taşır- çünkü çoğu türde lomber ponksiyon bölgesi omuriliğin ucundan uzaktır. Tıraş gibi bölgenin hazırlanması ve steril malzemelerin kullanımı da dahil olmak üzere uygun anestezi ve aseptik teknikler gereklidir. Steril cerrahi örtüler dikkate alınarak en azından steril eldivenler, şırıngalar ve iğneler kullanılmalıdır. BOS toplanması genellikle yan yatarken, sternum yatarken veya oturma pozisyonlarında gerçekleştirilir, serebral ventriküllere erişimi iyileştirir veya boyun veya omurganın fleksiyonu yoluyla omurlar arası boşluğu genişletir. Seçilen iğnenin boyutu ve uzunluğu, insan olmayan primatların türüne ve boyutuna uygun olmalıdır-. İşlem sırasında kullanılan teknikler, ekipman, sarf malzemeleri ve perioperatif bakım türe, araştırma hedeflerine ve klinik veteriner tercihlerine göre değişir.
Bazı araştırma protokolleri, zaman içinde sürekli BOS toplanmasını veya anestezi uygulanmamış deneklerden BOS örneklerinin toplanmasını gerektirebilir. Bu protokoller için, uyanık al yanaklı maymunlardan sürekli BOS toplanması, deri altı toplama bağlantı noktalarına bağlanan uzun süreli implante edilmiş CSF kateterleri aracılığıyla- gerçekleştirilebilir.
Yazar, toplam CSF hacmi, dura ponksiyonları için limitler veya öneriler, toplama sıklığı, güvenli geri çekilme hacmi ve CSF yenileme oranları ile ilgili en son referansları bulmak için her türlü çabayı göstermiştir. Bu konuyla ilgili literatür çoğu-insan olmayan primat için sınırlıdır. Ayrıca, -İnsan Olmayan Primat Veteriner Hekimleri Birliği üyeleri tarafından yapılan anketler, çeşitli kurumların CSF toplama için farklı yöntemleri başarılı bir şekilde kullandığını gösterdiğinden, toplama yöntemleri farklılık göstermektedir. Bu nedenle yazar, mevcut en iyi kanıtlara dayanarak BOS toplanmasına ilişkin değerlendirmeler ve öneriler sunmaktadır.
Referans olması açısından önceki çalışmalar, yetişkin erkek al yanaklı maymunlarda (8,0-10,6 kg) görünen CSF hacminin 10+/-0,06 mL olduğunu ve CSF akış hızının 0.018+/-0,003 mL/dak olduğunu belirlemiştir. Al yanaklı maymunlarda BOS oluşum hızı 28,6-44,2 μL/dak arasında değişmektedir. Daha öğretici tavsiyelerin geliştirilmesini kolaylaştırmak için bu alanda insan dışı primatlar üzerinde daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.
II. Potansiyel Olumsuz Reaksiyonlar
İnsan olmayan primatlarda BOS toplanması sırasındaki komplikasyonlar nadir olsa da, anatomik farklılıklar ve uygunsuz veya yetersiz teknik yöntemler numunenin hasar görmesine veya kanama, fıtıklaşma, enfeksiyon, beyin sapı, omurilik veya sinir köklerinde hasar ve hayvanın rahatsızlığı gibi komplikasyonlara yol açabilir. Bu komplikasyonlar nadir olmakla birlikte hayvan refahını tehlikeye atabilir.
İçerdiği riskler nedeniyle BOS bir veteriner veya eğitimli veteriner personeli tarafından toplanmalıdır. Başarısız BOS toplama girişimleri için uygulamalar farklılık gösterebilir. Bir kişinin en fazla üç başarısız girişimine izin vermek yaygın bir uygulamadır. Üçüncü başarısız denemeden sonra başka bir kalifiye kişi görevi devralmalıdır. İkinci kişi üç denemeden sonra BOS toplayamazsa girişimler durdurulmalıdır. Bu arada hayvan uygun analjezik tedavisi görecek ve anesteziden kurtulacaktır. Başarısız girişimlerden sonra toplama yerinin değiştirilmesi (örneğin serebral ventriküllerden lomber bölgeye) sıklıkla başarı ile sonuçlanır. Görüntüleme rehberliği olmadan başarısız bir girişim meydana gelirse, floroskopi-destekli iğne yerleştirme kullanılabilir. Başarı oranını artırmanın yanı sıra, görüntü rehberliği travmatik delinme oranını da azaltabilir.
Hayvan kafesine dönene ve desteksiz dik duruşunu koruyabilene kadar ameliyat sonrası izleme devam etmelidir. Hayvanların izlenmesi en az 24 saat veya Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan protokole göre sürmelidir. İzleme, temel fizyolojik, davranışsal ve lokomotor parametrelerin değerlendirmelerini içermelidir. Uyuşukluk, depresyon, koma ve kafaya basma belirtileri dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere nörolojik fonksiyon bozukluğu belirtileri özellikle değerlendirilmelidir. İnsan tıbbında BOS toplanmasını takiben baş ağrıları ve bunun sonucunda ortaya çıkan intrakraniyal hipotansiyon nadir değildir. İnsan olmayan primatlardaki bu olası komplikasyon göz önüne alındığında, analjezik tedavisi ameliyat sırasında sağlanmalı ve ameliyat sonrası 2-3 gün boyunca veya baş ağrısı veya omurga ağrısıyla ilişkili davranışlarla ilgili ameliyat sonrası gözlemlere dayanarak gerektiği şekilde sürdürülmelidir. En etkili analjezik rejimi ameliyat öncesi başlatılan kapsamlı tedaviyi içerebilir.
III. IACUC ile İlgili Hususlar ve Kayıt Tutma
IACUC, BOS toplanmasıyla ilgili prosedürleri ve tüm potansiyel komplikasyonları bilmeli ve bunları en az yılda bir kez gözden geçirmelidir. İlaç dozajları, ameliyat öncesi hazırlıklar, toplanan BOS hacimleri, toplama sıklığı ve ameliyat sonrası kısa-dönem ve uzun-dönem iyileşme gibi tüm ilgili bilgiler IACUC protokolünde açıklanmalı ve tıbbi kayıtlarda veya laboratuvar günlüklerinde uygun şekilde belgelenmelidir.
CSF, araştırma protokollerinde önemli bir veri olsa da uygunsuz toplama teknikleri hayvan refahını etkileyebilir. Protokolleri sunarken koleksiyonların sayısı ve sıklığına ilişkin bilimsel gerekçeler sunulmalıdır. Özellikle IACUC, CSF toplamayı içeren her teklifi dikkatle değerlendirmeli ve aşağıdakileri dikkate almalıdır:
1. Protokolde belirtilen bilimsel hedeflere ulaşmak için BOS toplanması gerekli midir?
2.Alternatif yöntemler ve daha az invaziv merkezi sinir sistemi değerlendirme yöntemleri (görüntüleme teknikleri gibi) mevcut mu ve eğer öyleyse bunlar dikkate alındı mı?
3.Operatörler uygun eğitimi aldılar mı ve yeterli becerilere sahipler mi?
4. Uygun perioperatif anestezi ve analjezik rejimleri sağlanacak mı? Anestezi ve analjezik planlarıyla ilgili olarak laboratuvar hayvanı veteriner hekimlerine danışılmalıdır.
5.Toplanan BOS hacmi hayvanın yaşını ve büyüklüğünü dikkate alıyor mu?
6.Dural ponksiyonların sayısı ve sıklığı hayvana uygun mu ve komplikasyon riski en aza indirilmiş mi? Eğer çalışmanın bir parçası olarak birden fazla BOS toplanması söz konusu ise, her bir hayvan için maksimum toplama süreleri belirtilmelidir.
7. Ameliyat sonrası takip planı uygun mu?
8. Ameliyat sonrası olası tüm komplikasyonlar göz önünde bulunduruldu mu ve ötenazi dahil tüm makul müdahaleler listelendi mi?
